手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
肿瘤学
磷酸化蛋白组学分析抗菌肽merecidin抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用机制
目的:分析抗菌肽merecidin处理人肺腺癌A549细胞后细胞内磷酸化蛋白质表达的差异,探究merecidin对肺腺癌A549细胞蛋白质活性、功能的影响以及涉及的信号通路。方法:采用9μmol/L merecidin处理肺腺癌A549细胞6 h,收集并提取总蛋白,SDS-PAGE检验全蛋白提取效果,加入胰酶来对蛋白质进行酶解。酶解所获肽段用TMT标记、采用HPLC进行分级、经IMAC修饰富集以及HPLC-MS/MS(液相色谱-质谱联用)分析。使用localization probability>0.75的标准对鉴定数据进行过滤,利用GO(Gene Ontology)数据库、KEGG(KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes)数据库和STRING数据库对磷酸化蛋白组学数据进行分析。结果:SDS-PAGE结果显示蛋白分离效果清晰、无明显降解,且实验组与对照组条带差异明显;质谱共鉴定出位于3 089个蛋白上的10 320个磷酸化修饰位点,其中以|Fold change|>或<1.5且P<0.05为阈值筛选出753个蛋白质及1 172个磷酸化位点;蛋白质功能富集显示,磷酸化水平显著变化的蛋白质功能主要集中在蛋白质分子结合、代谢活性、分子功能调节、细胞进程、生物功能调节等方面。整合通路生物信息学分析结果显示,差异蛋白与Ras、PI3K/AKT、mTor、AMPK等多条通路相关联。经过COG数据库筛选,发现差异性磷酸化蛋白主要集中在细胞信号转导,RNA转录、翻译的加工和修饰,核糖体合成蛋白质,细胞骨架蛋白形成,细胞内的物质转运、分泌和囊泡运输等多个方面。蛋白质互相作用层面分析结果显示,蛋白质形成以MAPK1、RPL23A、SRSF3H、NCBP1等蛋白为核心的相互作用网。磷酸化蛋白组学数据显示,merecidin处理后,ATG2B、ULK1、等蛋白显著上调,MAPK1、AKT1等蛋白显著下调。结论:磷酸化蛋白组学分析结果显示抗菌肽merecidin促进肺腺癌A549细胞凋亡,并提示merecidin可能诱导肺腺癌A549细胞自噬。
手机阅读本文
下载APP 手机查看本文
中国肿瘤生物治疗杂志
网络首发

搜 索