手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
临床医学
实时逆转录聚合酶链反应检测细胞因子表达相对定量方法的建立
目的 建立一种实时逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测细胞因子表达相对定量方法。方法 以肿瘤坏死因子α(TNFα)为待测基因 ,以葡萄糖 3 磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)为内参照进行检测。当靶基因和内参照基因片段克隆入载体后 ,进行纯化和定量及系列稀释 ,建立标准曲线 ,确定实时RT PCR的扩增效率 ;同时优化反应条件 ,使扩增效率接近 10 0 %。然后 ,检测 14份待检标本的TNFα和GAPDH的循环阈值 (Ct)。结果 该法检测的最低拷贝数为 10 3,线性范围为 10 3 ~ 10 9拷贝 ,批内变异系数 (CV)和批间CV分别为 1%和 8%。采用 2 -ΔΔCt法进行数据分析后 ,处理组TNFα的相对表达量比对照组高 8 6~ 9 8倍 ,平均为 9 2倍。结论 新建立的方法敏感 ,重复性好 ,数据处理简便、可靠 ,适用于检测任何基因的相对表达
7 212
中华检验医学杂志
2003年10期

搜 索