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基础医学
乙型肝炎病毒裸DNA转染原代大鼠肝细胞模型的建立
目的 建立乙型肝炎病毒(HBV)环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型,为进一步研究肝细胞与HBV之间的互动关系奠定基础。方法 采用原代大鼠肝细胞(PRH)作为靶细胞,电转环化HBV DNA,于转染后1~10d各时点分别以Southern杂交和斑点杂交分析HBV DNA的复制中间体与复制形式,以IMX系统检测HBsAg、HBeAg,以western免疫印迹、免疫斑点印迹和免疫细胞化学法检测HBcAg,用RT-PCR检测HBVS/X mRNA,并采用电镜观察有无Dane颗粒合成。以单纯电击PRH为对照组。结果 HBV环化裸DNA在PRH中的复制为游离型,可见rcDNA、cccDNA和ssDNA等复制中间体;表达的蛋白质产物、HBsAg于转染后各时点PRH裂解液中均可检测到(P/N值4.83~85.69,阳性≥2.1),峰值于1~3d,转染后1~10d平均P/N值为18.239±27.459;PRH培养上清液中未检测到HBsAg;HBeAg于PRH培养上清液和细胞裂解液中均呈阴性(P/N值<2.1);HBcAg于转染后1~3d时点内检测到低度表达;HBV SmRNA为阳性,而XmRNA为阴性;电镜未观察到Dane颗粒。结论HBV环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型稳定性、可重复性均良好。
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中华肝脏病杂志
2002年04期

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