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畜牧与动物医学
猪轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达
以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用优化的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了2 331bp的Vp4全长基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T中,构建质粒pGEM-T-Vp4。以SalⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp4和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp4基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp4。将pW425t-Vp4转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中,通过生长功能弥补筛选阳性克隆,SDS-PAGE分析,可见约87.67 Ku融合蛋白。Western blot分析表明,该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,研究结果为pW425t-Vp4在乳酸菌受体菌株中表达提供科学依据。
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中国预防兽医学报
2006年06期

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