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生物学
丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究
应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBAC25 中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),PCR扩增NS5A基因片段克隆到转移载体pBlueBacHisA中。重组转移质粒pBlueBacHis5A DNA与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染SF-9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5A基因的重组病AcNS5A。对重组病毒基因组DNA进行 酶切和PCR鉴定,证实HCV NS5A基因已插入重组病毒基因组中。AcNS5A感染SF-9细胞后,在 细胞中表达出一条64kD的蛋白,用Western-blot分析,结果表明这种蛋白与抗HCV HS5A特 异性抗体发生强烈反应,说明NS5A基因已在细胞中得到表达,应用免疫荧光技术与免疫组化 技术进一步研究NS5A蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布,结果表明,NS5A蛋白 在AcNS5A重组病毒感染细胞24h后主要分布在细胞质膜上,而在48h后则同时分布于细胞质膜 和细胞核内 ,在72h则完全布满整个细胞,我们认为NS5A蛋白定位于质膜和细胞核中,暗示着在病毒复 制过程中NS5A蛋白可能参与病毒RNA在质膜上复制和细胞基因表达的调?
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中国病毒学
2002年01期

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