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生物学
结核分枝杆菌Rv1886c蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备
目的表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tb)Rv1886c重组蛋白(Ag85B),并免疫小鼠制备多克隆抗体。方法采用PCR技术从M. tb(H37Rv)基因组中扩增Rv1886c基因,克隆至pET-28a质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-Rv1886c,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达Ag85B蛋白,并对表达条件进行优化。采用Ni-NTA His亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白经皮下注射BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA法检测抗体滴度,Western blot法检测抗体特异性。结果重组表达质粒pET-28a-Rv1886c经双酶切和测序鉴定证明构建正确;重组蛋白的最适表达条件为0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达4 h,获得了相对分子质量约30 000的重组蛋白;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,蛋白浓度约为1.5 mg/mL;免疫BALB/c小鼠后获得的抗Ag85B血清具有良好的抗原结合特性,且抗体滴度达1︰51 200。结论成功获得了高纯度的Rv1886c蛋白Ag85B,并制备了小鼠抗Ag85B多克隆抗体,为进一步研究TB的血清学早期诊断奠定了基础。
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中国生物制品学杂志
2022年01期
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