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肿瘤学
人源化抗肝癌单链抗体与牛蛙核糖核酸酶融合基因的构建及表达
利用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因并进行序列测定;将人源化抗肝癌单链抗体scFv基因与RC-RNase基因相连接,制备scFv-RC-RNase融合基因表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导进行表达。以SDS-PAGE和免疫印迹法对表达产物进行分析鉴定。序列分析表明,扩增出的RC-RNase基因片断大小约为405bp。经SDS-PAGE和免疫印迹分析显示,scFv-RC-RNase融合基因表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子质量约为38000的一条新生蛋白带,与预期结果相符。融合蛋白表达量占菌体总蛋白量的18.5%,主要以包涵体形式存在。表明成功地构建了抗肝癌scFv-RC-RNase融合基因,并在大肠杆菌中获得有效表达,为进一步进行肝癌的导向治疗研究奠定了基础。
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生物技术通讯
2003年05期

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