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青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备
制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物。蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清。血清经ProteinA纯化后,通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5,制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5。获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1∶729 000以上;制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原,效价高,满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求。
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