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基础医学
敲减人MCHR2基因抑制CHO细胞的放射性配体受体结合能力及Ca~(2+)释放
研究人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因特异的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体pGenesil-1-MCHR2-shRNA对MCHR2表达及特征的影响.将pGenesil-1-MCHR2-shRNA转染到稳定表达人MCHR2基因的CHO细胞中,通过RT-PCR和Western印迹检测MCHR2表达的变化;放射性配体结合实验(RBA)检测受体最大结合容量Bmax及平衡解离常数Kd值的变化;钙流检测实验观察配体MCH刺激后单个细胞Ca2+释放及MCH半数有效浓度EC50的变化.与转染pGenesil-1空载体组比较,pGenesil-1-MCHR2-shRNA能使MCHR2基因mRNA表达减少45.8%~66.4%;蛋白表达减少44.2%~81.0%;Bmax减少39.4%~78.7%,Kd值升高40.9%~81.9%;EC50升高114.8%~822.4%.MCHR2基因shRNA真核表达载体能有效抑制MCHR2基因的表达,减少Bmax、升高Kd值及EC50,从而对MCHR2生物活性等特征产生影响.
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中国生物化学与分子生物学报
2008年01期

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