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生物学
人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析
纤溶酶原K1 3功能区是近年发现的血管生成抑制因子 ,具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K1 3功能区的基因 ,DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9K上获得重组质粒pPIC9K13,转化毕节酵母GS115 ,用PCR和G418法筛选高拷贝转化子 ,进行摇瓶发酵。SDS PAGE和Westernblot分析结果证实K1 3基因已在GS115分泌表达 ,并具有免疫活性。选用 30L和 80L罐进行高密度发酵 ,甲醇诱导 48h细胞密度达到OD2 5 0~ 30 0 ,比摇瓶提高 5~ 6倍 ,表达量 15 0 2 0 0mg L。发酵上清液经StreamlineSP离子交换及Phe nyl Sephorose疏水层析纯化 ,在SDS PAGE上显示一条带 ,纯度 96 % ,动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性
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生物工程学报
2002年05期

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