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生物学
耐热嗜酸古细菌Sulfolobus acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的表达调控和性质研究
古细菌Sulfolobusacidocaldarius细胞内谷氨酰胺合成酶的表达量随着培养条件的改变有较大差异,RNA印迹表明,该差异是在mRNA水平受到调控.经DEAE Sepharose和SephacrylS 30 0两步分离酶蛋白,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和凝胶过滤测定分子质量,表明该酶为 12个相同亚基组成,分子质量为 6 30ku的多聚体.该酶的最佳pH为 7 3;对羟胺、谷氨酰胺、ADP和Mn2 + 的Km 值分别为 3 5mmol/L、1 3mmol/L、0 15mmol/L和 0 2 4mmol/L;其γ 谷氨酰转移酶活性和生物合成酶活性的最佳温度均为 90℃.Arrhenius曲线表明,γ 谷氨酰转移酶的活化能为4 7kJ/(mol·K),生物合成酶的活化能分别为2 9kJ/(mol·K)(4 0~ 75℃)和 10kJ/(mol·K)(5 5~ 90℃).对该酶的抑制剂研究发现,与其他来源的谷氨酰胺合成酶不同,甘氨酸、L 丙氨酸能明显抑制S.acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的活性,而常规的抑制剂如L 色氨酸、L 组氨酸、5′ AMP却没有抑制作用,甘氨酸、L 丙氨酸的抑制作用为竞争性抑制,推断该酶的活性调节与绝大多数革兰氏阳性菌一样不受腺甘酰化的影响
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生物化学与生物物理进展
2003年05期
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