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肿瘤学
腺病毒介导的uPAR反义核酸转移抑制肿瘤细胞的侵袭
为了观察尿激酶受体(uPAR)反义核酸对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用,用PCR方法扩增uPARcDNA 5′端 -4 6bp~ +45 4bp一段长 5 0 0bp的序列,利用DNA重组技术将其克隆到病毒载体pAdeno X中,构建出重组腺病毒载体pAdeno X uPAR( - )和pAdeno X uPAR( +).线性化后的重组腺病毒载体转染HEK2 93细胞 7天后,可以获得滴度分别为 1 5× 10 8pfu/ml和 0 5× 10 8pfu/ml的uPAR反义和正义核酸表达重组腺病毒,分别命名为Ad uPAR( -)和Ad uPAR( +).以不同的病毒感染指数(MOI)感染人肺巨细胞癌高转移株 95D肿瘤细胞,3天后用RNA印迹法可以检测肿瘤细胞uPAR正义和反义核酸表达水平,随着MOI的升高,Ad uPAR( - )感染的肿瘤细胞uPAR蛋白水平逐渐下降,肿瘤细胞的体外侵袭能力也明显下降,而感染Ad uPAR( +)的肿瘤细胞无明显变化.结果表明,重组腺病毒可以表达uPAR正义和反义核酸,uPAR反义核酸可以明显抑制人肺巨细胞癌高转移株 95D肿瘤细胞在体外的侵袭能力.
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生物化学与生物物理进展
2003年05期
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