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胡椒4CL基因的克隆及表达分析
根据胡椒4-香豆酸:辅酶A连接酶( 4-coumarate:coenzyme A ligase, 4CL)基因的部分序列设计引物,运用RACE方法获得其家族成员的1 个全长cDNA,命名为Pn4cl,长度2130bp,开放阅读框1638 bp,编码545个氨基酸。预测 Pn4CL分子量为59.57 ku,理论等电点为5.70。该基因含有AMP-binding( AMP-binding enzyme) 、CaiC ( Acyl-CoA synthetase ( AMP-forming ) /AMP-acid ligaseⅡ) 、PLN02246、AFD-class I等结合域,具有植物4CL所共有的保守结构域。系统进化分析表明,Pn4CL与北细辛的同源性最高,同时与木兰分支类植物的4CL聚类在一起,与菊分支的进化距离较近,与蔷薇分支的进化距离较远。亚细胞定位表明该蛋白定位在细胞膜上。Real-time RT-PCR 结果表明,该基因受外援激素SA和MeJA诱导表达,同时接种辣椒疫霉菌后,Pn4CL基因的表达量在抗/感两种胡椒中均出现先增加后减少的现象,并且在抗病种质中表达量较高。研究结果为Pn4CL的功能研究提供了理论依据。
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