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中药学
益肾固骨方基于Wnt5a/β-catenin信号通路调控炎性因子治疗肺腺癌骨转移实验研究
目的建立肺腺癌骨转移小鼠模型,探讨益肾固骨方通过Wnt5a/β-catenin通路对肺腺癌骨转移小鼠股骨处破骨细胞的影响。方法 70只C57BL/6雄性小鼠,采用随机区组法随机分组,将小鼠随机分配至7个组(每组10只)。从中任意选取1组小鼠,注射PBS至左后肢股骨,作为假手术组;接种Lewis细胞悬液至其余60只小鼠左后肢股骨。假手术组和模型对照组小鼠用生理盐水灌胃,中药组(低)、中药组(中)、中药组(高)分别灌胃3、12、24g/kg剂量的益肾固骨方,西药组腹腔注射唑来膦酸(50μg/kg),中西联合用药组灌胃低剂量的益肾固骨方并腹腔注射唑来膦酸(50μg/kg),治疗21d。抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法200倍光镜下观察小鼠左后肢股骨处破骨细胞数量,RT-PCR法检测Wnt5a、β-catenin、Gsk-3β、p-Gsk-3β、Dkk1、Tnf-α、Il-17 mRNA的表达,免疫组织化学法检测WNT5A、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、DKK1、TNF-α、IL-17蛋白的表达。采用单因素或双因素方差分析对数据进行统计分析。结果 (1)破骨细胞数量结果表明,7组间均值差异有统计学意义,F=13.113,P<0.001,两两多重比较显示,除了中药组(中),模型对照组与其余各组比较,均P<0.001。模型组破骨细胞数量最高(73±13.61),而中药组低剂量(41±8.93)、高剂量(41±17.63)、联合用药组(51±7.95)破骨细胞数量接近假手术组(45±13.06)。(2)与假手术组(2.30±1.27,1.37±0.45)相比,模型组(18.71±2.29,11.50±5.17)的β-catenin mRNA和Gsk-3βmRNA表达升高,差异有统计学意义,P<0.001;与模型组(18.71±2.29,11.50±5.17)比较,西药组(1.62±0.19,0.26±0.10)、联合用药组(1.79±0.28,0.46±0.16)的β-catenin和Gsk-3βmRNA表达均降低,差异均有统计学意义,均P<0.001。(3)与假手术组(0.92±0.36,1.86±1.07,0.95±0.23)比较,模型对照组(0.21±0.13,0.16±0.03,0.54±0.30)的Wnt5a、β-catenin和DKK1蛋白染色阳性面积降低,差异均有统计学意义,均P<0.01;与假手术组(3.34±2.47,0.95±0.02)比较,模型对照组(14.63±2.11,6.55±2.57)的GSK-3β、p-GSK-3β蛋白染色阳性面积升高,差异均有统计学意义,均P<0.01。与模型对照组(0.92±0.36)相比,西药组(2.57±0.82)和联合用药组(2.84±0.92)的Wnt5a染色阳性面积升高,差异均有统计学意义,均P<0.01。与模型对照组(0.16±0.03)相比,中药组中剂量(0.37±0.29)和联合用药组(0.60±0.21)的β-catenin染色阳性面积升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型对照组(14.63±2.11)相比,假手术组(3.34±2.47)、中药组低剂量(1.01±0.59)、中剂量(3.94±1.44)的GSK-3β蛋白染色阳性面积降低,差异均有统计学意义,均P<0.001。与模型对照组(14.63±2.11,6.55±2.57)相比,中药组高剂量(2.71±1.49,4.50±0.39)、西药组(0.76±0.38,0.92±0.61)、联合用药组(3.66±1.12,0.54±0.24)的GSK-3β、p-GSK-3β蛋白染色阳性面积降低,差异均有统计学意义,均P<0.001。与模型对照组(0.54±0.30)相比,中药组中剂量(0.76±0.08)、西药组(0.72±0.07)的DKK1染色阳性面积升高,差异有统计学意义,P<0.01,P<0.05。(4)与模型对照组(0.17±0.11)相比,西药组(3.52±0.87)和联合用药组(3.57±2.13)的Il-17 mRNA表达增加,差异均有统计学意义,均P<0.001。与假手术组(1.00±0.27)相比,模型对照组(3.59±1.18)的Tnf-αmRNA表达增加,差异有统计学意义,P<0.01。与模型对照组(3.59±1.18)相比,西药组(0.28±0.18)和联合用药组(0.29±0.16)的Tnf-αmRNA表达降低,差异均有统计学意义,均P<0.001。(5)与模型对照组(2.83±0.64)相比,中药组低剂量(3.91±0.14)、联合用药组(3.92±2.07)的IL-17蛋白的染色阳性面积升高,差异均有统计学意义,均P<0.01。与假手术组(3.92±1.64)相比,模型对照组(7.84±3.38)的TNF-α蛋白染色阳性面积升高,差异有统计学意义,P<0.05。与模型对照组(7.84±3.38)相比,中药组高剂量(3.26±1.24)、西药组(0.78±0.12)和联合用药组(0.69±0.13)的TNF-α染色阳性面积降低,差异均有统计学意义,均P<0.01。结论益肾固骨方可能通过Wnt5a/β-catenin信号通路及下游分子调控炎性因子治疗肺腺癌骨转移。
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中华肿瘤防治杂志
2020年24期

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