手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
肿瘤学
LncRNA MALAT-1调控miR-125a-5p及其靶基因Rab25参与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药机制研究
目的在前期已经验证miR-125a-5p通过调控Rab25参与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal-growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药的基础上,本研究进一步检测出临床具有EGFR突变的NSCLC EGFR-TKIs耐药的患者中lncRNA MALAT-1的相对表达量高于具有EGFR突变的NSCLC未治疗的患者,同时通过生物信息学软件预测出MALAT-1与miR-125a-5p有结合位点,遂预测MALAT-1可能通过调控miR-125a-5p及其靶蛋白Rab25参与NSCLC EGFR-TKIs的耐药。方法采用SAM双载体慢病毒转染技术过表达肺腺癌细胞(PC9细胞)中的MALAT-1基因,Crispr/Cas9慢病毒转染技术敲除肺腺癌厄洛替尼耐药细胞(PC9ER细胞)中的MALAT-1基因;qRT-PCR实验检测未治疗患者血清标本中MALAT-1的表达量和亲本及耐药细胞组中MALAT-1和miR-125a-5p的变化;CCK-8实验验证MALAT-1对两组细胞耐药指数的影响;细胞凋亡和周期实验检测MALAT-1对细胞凋亡率和细胞周期分布的影响:免疫荧光定性检测MALAT-1对靶基因Rab25的影响。结果MALAT-1的相对表达量临床耐药患者组(3.280±0.369)高于未治疗患者组(1.000±0.000),差异有统计学意义,t=6.185,P=0.004;SAM双载体及Crispr/Cas9慢病毒转染技术成功在PC9细胞中过表达MALAT-1及PC9ER细胞中敲除MALAT-1;与PC9细胞(1.000±0.000)相比,PC9ER细胞中MALAT-1的相对表达量升高(6.113±0.546,t=10.010,P<0.001),PC9ER细胞中miR-125a-5p的相对表达量降低(0.233±0.044,t=16.470,P<0.001),PC9+MALAT-1细胞中miR-125a-5p的相对表达量降低(0.303±0.012,t=14.900,P<0.001);在厄洛替尼作用48h后,PC9ER和PC9+MALAT-1细胞的IC50高于PC9细胞(tPC9ER=7.566,PPC9ER <0.001;tPC9+MALAT-1=9.766,PPC9+MALAT-1<0.001),PC9-shMALAT-1细胞IC50低于PC9细胞,差异有统计学意义,t=6.025,P=0.002。PC9+MALAT-1细胞凋亡率(1.333±0.088)低于PC9细胞(7.100±0.379),t=14.270,P<0.001;PC9ER-shMALAT-1细胞(14.970±0.410)凋亡率高于PC9ER细胞(1.267±0.088),t=33.900,P<0.001;PC9+MALAT-1细胞G0/G1期细胞比例低于PC9细胞(t=11.370,P<0.001),S期细胞比例高于PC9细胞,t=9.365,P<0.001,PC9ER-shMALAT-1细胞G0/G1期比例高于PC9ER细胞(t=14.060,P<0.001),S期细胞比例低于PC9ER细胞(t=8.365,P<0.001);PC9+MALAT-1细胞(184.900±6.712)中Rab25的表达量高于PC9细胞(25.990±1.820),t=29.880,P<0.001;而PC9ER-shMALAT-1细胞(27.060±1.400)中Rab25的表达量低于PC9ER细胞(193.200±2.500),t=31.250,P<0.001。结论 MALAT-1的过表达导致PC9细胞的增殖能力及其对厄洛替尼的耐药能力增加,细胞凋亡率降低,而MALAT-1的敲除,能使PC9ER细胞的增殖能力及细胞对厄洛替尼的耐药能力降低,细胞凋亡率增加;初步验证了lncRNA MALAT-1通过调控miR-125a-5p及其靶基因Rab25参与NSCLC EGFR-TKIs的耐药。
0 104
手机阅读本文
下载APP 手机查看本文
中华肿瘤防治杂志
2020年22期

搜 索