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基础医学
色素上皮细胞衍生因子表达载体的构建
目的构建色素上皮细胞衍生因子(PEDF)的表达载体。方法从孕8周的胚胎绒毛中提取总RNA,经RT-PCR扩增,获得编码人PEDF的全基因序列,采用T-A克隆法,将PEDF基因克隆入PMD18-T中间载体并转化入大肠杆菌E.coliJM109中,提取重组质粒并酶切鉴定,将鉴定正确的质粒命名为PMD18-T/PEDF,DNA测序,测序正确后构建重组表达载体pET28a/PEDF,转化大肠杆菌E.coliDH5α并酶切鉴定。结果重组表达载体pET28a/PEDF在大肠杆菌E.coliDH5α中克隆表达。结论构建了PEDF重组表达载体pET28a/PEDF,为重组PEDF的进一步表达及纯化奠定了基础。
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免疫学杂志
2006年01期
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