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基础医学
Bacteroides coprocola菌β-葡萄糖苷酶基因的表达纯化及活性测定
目的构建一种拟杆菌Bacteroides coprocola(BC)β-葡萄糖苷酶基因的原核表达载体,并纯化该β-葡萄糖苷酶,检测其水解不同底物的能力。方法以NCBI数据库中提供的BC菌β-葡萄糖苷酶基因序列为参考,合成出该基因的全长序列,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体p GEX-4T-1中;以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白; SDS-PAGE和Western印迹检测β-葡萄糖苷酶基因的表达,并通过不同底物检测其活性及比较各法的优劣。结果 PCR扩增结果与双酶切实验表明,原核表达载体构建成功; Western印迹结果显示,β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中特异表达;酶活性实验表明,该菌β-葡萄糖苷酶在对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(4'-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside,p NPG)和京尼平苷(geniposide)中均有活性,且用p NPG作为底物测定的活性结果更可靠。结论用两种底物成功检测出纯化的BC菌β-葡萄糖苷酶的活性,为进一步研究其功能奠定了基础。
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军事医学
2018年10期

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