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肿瘤学
人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒的构建及对人肺腺癌SPCA-1细胞HIF-1α表达的影响
目的构建人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒Ad.HIF-1α,并观察其对人肺腺癌细胞SPCA-1的影响。方法采用酶切、连接、转化等方法,利用AdEasy系统构建插入HIF-1αRNAi片段的重组腺病毒Ad.HIF-1α。氯化铯梯度离心法纯化病毒。病毒功能滴度采用传导293细胞的方法,以2MOIAd.HIF1α传导SPCA-1细胞,48h后应用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)表达和HIF-1α蛋白表达。HIF-1αmRNA表达用荧光定量PCR检测。结果酶切和卡那霉素抗性筛选证实,重组穿梭载体pAdTrack.HIF-1α和腺病毒质粒pAd.HIF-1α均构建正确。pAd.HIF-1α导入293细胞3d,约15%的细胞表达GFP,最终所获病毒滴度为5.0×1010TU/mL。Ad.HIF-1α转导SPCA-1细胞48h,GFP表达率为92%;HIF-1αmRNA和蛋白表达分别下降89%和87%。结论成功构建人HIF-1α基因RNAi腺病毒,为通过阻断HIF-1α基因治疗肺癌提供初步实验依据。
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基础医学与临床
2007年11期
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