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基础医学
人rBPI_(23)在大肠杆菌DH5α中的表达及其多克隆抗体的制备
目的制备人rBPI23蛋白并免疫家兔获得特异性多克隆抗体。方法将本室制备的pBV220-synBPI600表达载体转化感受态E.coliDH5α,温控诱导后,获得以包涵体形式表达的目的重组蛋白;用SDS-PAGE鉴定分子质量,West-ernblot鉴定抗原性;免疫家兔获得抗rBPI23抗血清,经饱和硫酸铵沉淀获得多克隆抗体,间接法ELISA检测抗体效价,Westernblot分析抗体的特异性。结果重组蛋白主要以包涵体形式表达,SDS-PAGE显示其分子质量约23ku,与预期结果相符;重组蛋白能与市售兔抗人BPI抗体特异性结合;免疫家兔获得高效价(1∶320000)抗血清,上述抗体能与rBPI23及人BPI标准品特异性结合。结论成功制备了人rBPI23,免疫家兔获得高效价抗人rBPI23多克隆抗体,为制备单克隆抗体及后期建立BPI免疫学检测方法奠定基础。
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基础医学与临床
2007年11期
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