手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
呼吸系统疾病
miR-140-5p对炎症模型支气管上皮细胞炎症因子分泌的影响
目的:研究miR-140-5p对呼吸道合胞病毒(RSV)感染诱导的炎症模型支气管上皮细胞炎症因子分泌的影响和机制。方法:(1)利用生物信息学软件TargetScan分析miR-140-5p和TLR4的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。(2)人支气管上皮细胞16-HBE分成空白对照组、RSV组、miR-NC+RSV组、miR-140-5p+RSV组共4组,RSV组、miR-NC+RSV组、miR-140-5p+RSV组细胞感染RSV(MOI=1)24 h,然后miR-NC+RSV组、miR-140-5p+RSV组脂质体法分别转染miR-140-5p阴性对照、mimic。转染24 h后,ELISA法检测培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量,Griess法检测培养上清中NO含量,Western blot法检测细胞中iNOS和TLR4蛋白的表达。(3)将TLR4阴性对照载体和miR-140-5p mimic(miR-140-5p组)、TLR4过表达载体和miR-140-5p mimic(miR-140-5p+TLR4)分别共转染到16-HBE细胞中,24 h后感染RSV(MOI=1),继续孵育24 h,然后进行前述指标的检测。结果:(1)TargetScan预测miR-140-5p和TLR4的3’UTR存在互补结合位点,双荧光素酶报告实验结果显示,miR-140-5p mimic和TLR4-3’UTR-WT共转染的细胞荧光素酶活性降低(P<0.05)。(2)RSV组和miR-NC+RSV组细胞中TRL4蛋白表达水平高于空白对照组,而miR-140-5p+RSV组细胞中TRL4蛋白表达水平低于RSV组和miR-NC+RSV组(P<0.05)。(3)与空白对照组比较,RSV组和miR-NC+RSV组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8分泌量,NO生成量和细胞中iNOS蛋白表达水平均升高;而与RSV组和miR-NC+RSV组比较,miR-140-5p+RSV组上述指标均降低(P<0.05)。(4)与miR-140-5p组细胞比较,miR-140-5p+TLR4组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8分泌量,NO生成量,细胞中iNOS、TLR4蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:miR-140-5p可通过靶向抑制TLR4的表达,降低RSV感染的支气管上皮细胞炎症因子的分泌水平。
0 112
手机阅读本文
下载APP 手机查看本文
郑州大学学报(医学版)
2021年03期
相似文献
图书推荐
相关工具书

搜 索