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生物学
猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定
为研究白细胞介素-12在机体免疫应答中的作用,从猪外周血提取单个核细胞(PBMCs),用含LPS的培养基培养细胞,从培养2 h和12 h的活化细胞中分别提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出编码猪IL-12两个亚基的基因,其大小分别为720 bp(P35)和1 044 bp(P40),将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化,用SacI和SalI双酶切后,分别将其连接至pUC18质粒上,进行质粒PCR和SacI、SalI双酶切鉴定后筛选阳性克隆,并进行序列测定和分析。序列分析表明P35基因开放阅读框含有669个核苷酸,序列与人、小鼠和羊同源性分别为79.2%,37.6% ,86.1%,P40基因开放阅读框含有975个核苷酸,与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为79.5%,53.1%,84.3%。结果表明克隆到了猪白细胞介素-12 P35和P40两个亚基的基因,得到的P35基因序列与国外报道完全一致,P40基因序列与发表的序列有4个碱基差异,提示P40基因可能存在多态性。
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动物医学进展
2002年01期

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