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生物学
查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达
目的 构建查菲埃立克体特异性表面抗原 P120基因的原核表达质粒,并使该基因在 E.coli中高效表达。方法 依据查菲埃立克体P120基因序列设计一对特异性引物,用PCR从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码P120抗原决定簇的基因片段,而后将PCR产物用T载体克隆。用酶将PCR产物从T载体切下,将它定向插入原核表达质粒PET11C构建PET11C/p120重组质粒;用重组质粒转化E.coli BL21(DE3)。结果 从DNA片断中扩增出一约1119 bp产物,经测序为查菲埃立克体p120基因。PET11C/p120重组质粒转化的 E.coli在 IPTG的诱导下产生一分子量为41000的天然蛋白,它的产量占细菌蛋白总量的 28%,用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论 查菲埃立克体特异性的P120抗原在原核表达系统被高效表达,该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。
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第三军医大学学报
2001年08期

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