手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
生物学
大鼠IL-12基因双亚基真核表达质粒的构建及表达
目的构建双亚基共表达的大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒。方法用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35两个亚基的cDNA,依次克隆入pcDNA3.1(-)/myc-His A质粒中,以脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12。用电转染法将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-PCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达。结果所得rp40 cDNA序列与GenBank NM022611和AF133197、rp35 cDNA序列与GenBank NM053390和AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。质粒转染9L细胞,获得9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-J2(p70)蛋白含量达139.0~162.1 PG/mL,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达阳性。结论成功构建并鉴定了大鼠IL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12。
0 7
手机阅读本文
下载APP 手机查看本文
中华神经医学杂志
2007年07期
相似文献
图书推荐
相关工具书

搜 索