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肿瘤学
基于CRISPR/Cas9技术敲除PD-L1对非小细胞肺癌PC-9/T790M细胞吉非替尼耐药敏感性的影响
目的:探讨在具有T790M突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除程序性细胞死亡配体1 (PD-L1)后对吉非替尼耐药敏感性的影响,阐明PD-L1对PC-9/T790M细胞耐药敏感性的作用机制。方法:常规体外培养PC-9细胞和PC-9/T790M细胞,经CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除PC-9/T790M细胞中PD-L1后,分为PC-9、 PC-9/T790M和Cas9 PC-9/sgRNA 3组细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中PD-L1蛋白表达水平,CCK-8法检测5、10和20 mmol·L~(-1)吉非替尼干预24、48和72 h后各组细胞存活率。体内实验中检测吉非替尼干预后各组移植瘤体积,HE染色观察移植瘤组织病理形态表现。结果:Western blotting法检测,经CRISPR/Cas9编辑后敲除PD-L1的sgRNAl#组与PC-9、 PC-9/T790M、 sgRNA2#和sgRNA3#组比较,PD-L1蛋白表达水平最低。CCK-8法检测,在应用药物干预前Cas9 PC-9/sgRNA组细胞增殖活性与PC-9组、PC-9/T790M组比较,差异无统计学意义(P>0.05),10 mmol·L~(-1)吉非替尼干预72 h后PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组细胞存活率与PC-9/T790M组比较明显降低(P<0.01)。体内实验,与PC-9/T790M组比较,吉非替尼干预后PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组裸鼠移植瘤体积明显减少(P<0.05);PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组移植瘤细胞呈现中、重度坏死,而PC-9/T790M组移植瘤组织病理形态无明显变化。结论:在耐药PC-9/T790M细胞中应用CRISPR/Cas9编辑技术敲除PD-L1能够明显提高吉非替尼的药物敏感性。
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吉林大学学报(医学版)
2021年02期
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