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基础医学
吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立
目的:探讨吡柔比星(THP)对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法:常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度(1×10~(-6)mol·L~(-1)、1×10~(-5)mol·L~(-1)、 1×10~(-4)mol·L~(-1)、 1×10~(-3)mol·L~(-1)和1μmol·L~(-1)、3μmol·L~(-1)、5μmol·L~(-1)、7μmol·L~(-1)、9μmol·L~(-1)和10μmol·L~(-1)THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、 12、 24、 36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧(ROS)探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9 (Caspase-9) mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、 Bcl-2、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)和活化型Caspase-9 (Cleaved Caspase-9)蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,1、5和9μmol·L~(-1)THP组H9C2细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高(P<0.05或P<0.01),SOD活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2 mRNA表达水平降低(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01)。结结论论:THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5μmol·L~(-1)是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。
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吉林大学学报(医学版)
2020年05期
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