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肿瘤学
细胞周期检测点的流式细胞术分析
背景与目的:真核细胞的细胞周期运行遵循着严格的时相次序,这种精密的延缓和强制的次序,由细胞监控机制——检测点来完成,检测点功能的丧失会导致肿瘤的发生。传统的细胞周期检测点分析多数基于群体细胞DNA直方图的流式细胞术。本研究以晚G1期检测点为模式,建立一种新的细胞周期检测点分析方法——Cyclins/DNA双参数流式细胞术,并评价应用该方法进行细胞周期检测点分析的可行性和优越性。方法:将紫外线照射诱导后的人类急性淋巴细胞型白血病细胞株(MOLT-4)于不同时间点收获固定,分两组进行流式细胞仪检测:一组用DNA直方图法,Modifit软件分析计算G0/G1期细胞总数;另一组应用CyclinE/DNA双参数流式细胞术对G1晚期细胞CyclinE的荧光强度、阈值及G0/G1各亚期细胞数量进行定量分析,并比较两组实验结果。结果:用DNA直方图法观察到紫外线照射后0~4hG0/G1期细胞总数基本不变(5300~5500),6h后开始上升(6241,12.6%)。而用CyclinE/DNA双参数法观察到:(1)G1晚期细胞的CyclinE荧光强度于照射后短时间内便开始变化,1h上升为341.2(对照295.1,15.6%),6h上升为577.6(95.7%),此时CyclinE阈值上升到5.4(0h为2.0);(2)G0/G1各亚期细胞数目变化趋势不明显:G1晚期细胞数6h时略为减少(此时凋亡率为5.61%),G1早期细胞数缓慢上升。结论:CyclinE/DNA双参数流式细胞术将CyclinE的荧光强度及表达阈值定量化,对于细胞晚G1期检测点的检测比传统的DNA直方图法更为敏感和精确。
癌症
2005年09期

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