目的 :深入研究MTS1 基因 β 启动子的转录激活与E2F1 转录因子的相互作用关系 ,阐明该基因转录水平的调控机制。方法 :用PCR定点突变方法或酶切连接法 ,构建β 启动子0.38kbSacⅡ -SacⅠ酶切片段中E2F1 A、B、C任意2个位点或3个位点均突变的 pGL3 重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法 ,将构建的重组质粒转染MTS1 基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞 ,检测pGL3 重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。 结果 :构建的E2F1 A、B、C结合位点突变的重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2F1 位点野生型重组质粒比较 ,突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少 ,以3个位点均突变的重组质粒为明显。 结论 :构建的E2F1 A、B、C2个或3个结合位点均突变重组质粒成功 ,可通过基因转染用于研究MTS1 基因的功能试验中 ;MTS1 基因β 启动子的转录活性可能与E2F1 转录因子的反式激活有关。