摘要
ABSTRACT
缩略语表
1 前言 1.1 云斑天牛 1.1.1 云斑天牛的形态特征及生物学特性 1.1.2 云斑天牛的危害 1.1.3 云斑天牛的寄主范围及地域分布 1.1.4 云斑天牛的防治措施 1.1.4.1 改造杨树种植方式和培育新品种 1.1.4.2 物理防治方法 1.1.4.3 化学防治方法 1.1.4.4 生物防治方法 1.2 苏云金芽胞杆菌 1.2.1 苏云金芽胞杆菌生物学特性 1.2.2 苏云金芽胞杆菌的杀虫活性成分 1.2.3 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白及其编码基因 1.2.4 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白基因的命名和分类 1.2.5 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白作用机制 1.2.6 苏云金芽胞杆菌防治鞘翅目害虫的研究状况 1.3 研究的目的和意义
2 材料和方法 2.1 材料 2.1.1 菌株、质粒与供试昆虫 2.1.2 培养基 2.1.3 溶液 2.1.3.1 常用溶液的配制 2.1.3.2 SDS-PAGE相关溶液的配制 2.1.4 所用试剂 2.1.4.1 抗生素 2.1.4.2 试剂 2.1.4.3 试剂盒 2.1.5 仪器 2.2 方法 2.2.1 云斑天牛成虫采集和饲养 2.2.1.1 云斑天牛成虫的采集 2.2.1.2 室内饲养方法 2.2.2 生物测定 2.2.2.1 苏云金芽胞杆菌菌悬剂的制备 2.2.2.2 晶体蛋白粉剂、芽胞粉剂、胞晶混合物粉剂的制备 2.2.2.3 初筛 2.2.2.4 复筛 2.2.2.5 从云斑天牛体内重新分离苏云金芽胞杆菌 2.2.2.6 云斑天牛肠道分离菌株的生测验证和16SrDNA鉴定 2.2.2.7 ZQ-89菌株杀虫活性成份的分析 2.2.2.8 生测结果的分析方法 2.2.3 ZQ-89菌株形态观察及晶体蛋白的分析 2.2.3.1 ZQ-89菌株形态观察 2.2.3.2 ZQ-89菌株晶体蛋白的分析 2.2.4 ZQ-89菌株质粒和总DNA的制备 2.2.4.1 ZQ-89菌株质粒的抽提 2.2.4.2 ZQ-89菌株总DNA的抽提 2.2.5 ZQ-89菌株抗虫基因的克隆及序列分析 2.2.5.1 Cry1Ac-89基因的克隆 2.2.5.2 抗虫基因cry1Ac-89的TA克隆及测序 2.2.5.3 Cry1Ac-89基因和蛋白质氨基酸序列的分析 2.2.6 ZQ-89菌株中含启动子cry1Ac-89基因片段的扩增 2.2.6.1 反向PCR(inversePCR)法扩增cry1Ac-89基因的启动子 2.2.6.2 含启动子的cry1Ac-89基因片段的扩增 2.2.7 pHT304-Ac89载体的构建 2.2.7.1 大肠杆菌E. coli DH5 α的质粒抽提 2.2.7.2 含启动子cry1Ac-89基因片段和质粒pHT304的双酶切与连接 2.2.7.3 pHT304-Ac89转化大肠杆菌E. coli DH5 α并验证 2.2.8 工程菌ZAC-89构建 2.2.8.1 pHT304-Ac89载体DNA去盐 2.2.8.2 pHT304-Ac89转化BMB171 2.2.9 工程菌ZAC-89的基本特征 2.2.9.1 ZAC-89菌体和伴胞晶体形态观察 2.2.9.2 ZAC-89伴胞晶体产生过程观察 2.2.9.3 ZAC-89晶体蛋白SDS-PAGE检测
3 结果与分析 3.1 生物测定结果 3.1.1 初筛结果 3.1.2 复筛结果及分析 3.1.2.1 第一次复筛 3.1.2.2 第二次复筛 3.1.3 FZQ-89的分离、生测验证和16SrDNA鉴定 3.1.3.1 FZQ-89的分离与形态观察 3.1.3.2 FZQ-89菌株的生测验证 3.1.3.3 FZQ-89菌株的16SrDNA鉴定 3.1.4 ZQ-89抗虫活性成分分析 3.1.4.1 ZQ-89菌株抗虫活性成分确定 3.1.4.2 ZQ-89菌株晶体蛋白抗虫活性分析 3.2 ZQ-89菌株晶体蛋白的分析 3.2.1 ZQ-89菌株晶体蛋白SDS-PAGE检测 3.2.2 ZQ-89菌株晶体蛋白的肽指纹图谱分析 3.3 ZQ-89菌株质粒和基因组DNA的提取 3.4 ZQ-89抗虫基因的克隆及分析 3.4.1 Cry1Ac-89基因的克隆 3.4.2 ZQ-89菌株cry1Ac-89基因及蛋白序列的分析 3.5 工程菌ZAC-89的构建 3.6 工程菌ZAC-89基本特征 3.6.1 ZAC-89菌体及伴胞晶体形态观察 3.6.2 ZAC-89伴胞晶体产生过程观察 3.6.3 ZAC-89晶体蛋白SDS-PAGE检测
4 讨论
参考文献
致谢
附录Ⅰ
附录Ⅱ
附录Ⅲ