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外科学
BMP-2对损伤膑韧带修复的作用研究
目的:肌腱的损伤修复仍然是一个难以解决的临床问题。髌韧带在临床治疗上常作为自体移植物来治疗损伤肌腱,但实施自体移植的髌韧带在术后修复较为缓慢并存在不少并发症,因此寻求有效的方法来促进损伤韧带修复有重要意义。本研究以大鼠髌韧带为模型,对其细胞增殖、衰老,及BMP-2可能促进其损伤修复进行研究。 方法与结果:1)使用爬行法和酶消化法分离出大鼠髌韧带细胞,观察比较细胞形态,发现经爬行法分离的年青SD大鼠髌韧带细胞主要呈现长梭形,而经酶消化法分离的年青SD大鼠髌韧带细胞主要呈扁平多角型;经爬行法分离的年老SD大鼠髌韧带细胞形态经历了由梭形到圆形到扁平多角形的过程,而经酶消化法分离的年老SD大鼠髌韧带细胞主要呈扁平多角型;经爬行法分离的年青与年老髌韧带细胞形态差异不大,一开始均为梭形,传至第四代后均为扁平多角形;经酶消化法分离的年青与年老髌韧带细胞形态差异不大,均呈现扁平多角形。2)用RT-PCR检测经分离细胞相应的表面标记物,发现用爬行法分离出来的年青髌韧带细胞表达CD44和CD102,用爬行法分离出来的年老髌韧带细胞表达CD13和CD102。用酶消化法分离出来的年青髌韧带细胞和年老髌韧带细胞均表达CD4,CD13及CD102。结果表明两种方法分离出的细胞可能存在不同亚群,且不同亚群在两种分离方法所得细胞中的比例可能不同。3)使用细胞计数法对经不同方法分离的不同代数髌韧带细胞的生长曲线进行分析,发现经分离大鼠髌韧带细胞多数在体外培养约72小时左右进入对数增殖期,经过3—4天增殖,于体外培养124小时左右进入平台期。表明经分离的年青与年老SD大鼠髌韧带细胞增殖速度较慢。4)β-gal染色,结果表明经爬行法分离的年青髌韧带细胞在体外培养时随着代数增加呈阳性的细胞数目增加,经爬行法分离的年老髌韧带细胞随着代数增加呈阳性的细胞数目增加不多。而经酶消化法分离的年青髌韧带细胞随着代数增加呈阳性的细胞数目增加不多,经酶消化法分离的年老髌韧带细胞随着代数增加呈阳性的细胞数目增加。上述结果表明经分离的髌韧带细胞存在复制性衰老,不同群可能复制性衰老速度不一样。5)使用原位杂交和RT-PCR法进行检测,发现大鼠髌韧带及经分离的髌韧带细胞均表达BMP-2。6)使用BMP-2对经分离的髌韧带细胞进行处理,通过生长曲线,流式细胞技术,细胞移行,核型分析和体内植入研究,所得结果证明:BMP-2能促进韧带细胞的增殖和移行,并促进损伤髌韧带的修复。 结论:(1)大鼠髌韧带细胞可能存在不同的群。(2)经分离的大鼠髌韧带细胞只有有限的体外增殖能力,并存在复制性衰老。(3)BMP-2能促进大鼠髌韧带细胞的增殖和移行,从而促进损伤大鼠髌韧带的修复。
机 构:
领 域:
硕士论文
《暨南大学》 2009年硕士论文

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