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柑橘黄化脉明病毒分子检测及生物学研究
柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow clearing vein virus,CYVCV)作为2009年我国发现侵染柑橘的一种新病毒,对其分子特性和生物学特性研究较少。已有研究表明,CYVCV主要危害柠檬和酸橙,造成典型的黄化脉明症状。CYVCV可侵染多个柑橘品种,已有实验表明该病毒可高效地通过蚜虫从柠檬传播到豆科植物,在柑橘之间传播的昆虫传播介体尚未明确,因此该病毒病害可能存在我国柑橘生产中大流行的风险。为明确CYVCV在我国柑橘上的分布特点及CYVCV的分子特性和生物学特性,本研究利用RT-PCR对采集我国7个省份的柑橘样品进行了CYVCV检测,测定了甲基转移酶编码基因分离物和外壳蛋白编码基因序列分析CYVCV的分子特性,利用CYVCV感染的柠檬植株芽片嫁接到不同种类柑橘进行生物学特性研究。取得的研究结果如下:1.2013-2015年期间对采自湖南、湖北、江西、四川、云南、贵州和浙江7个省的450份柑橘样品利用RT-PCR技术检测CYVCV,共有77份柑橘样品被检测到CYVCV,有6个省份的样品检测到CYVCV阳性(浙江样品外),其中湖南的样品检出率达到34.2%;对采自湖北的柑橘样品进行CYVCV的RT-PCR检测其中当阳样品的检出率高达53.3%,但有些地区样品中未检测到CYVCV;通过对携带有CYVCV的样品进行症状进行观察和分析,叶背面叶脉附近水渍状斑、叶脉凸起、叶脉透明和叶脉黄化可能与CYVCV的侵染相关,在有些未表现症状的样品中也检测到CYVCV阳性,说明CYVCV侵染某些柑橘品种存在潜隐的特点。2.对采集自湖南、湖北、江西、云南、四川和贵州6个省份的阳性柑橘样品上的,CYVCV分离物的甲基转移酶编码基因和外壳蛋白编码基因进行了测定,这些CYVCV分离物的met中的核苷酸相似性和氨基酸相似性均达到98%以上,与土耳其分离物Y1的核苷酸相似性为97-98%,氨基酸相似性98-99.3%,同时发现CYVCV中国分离物相对于土耳其分离物存在多个共变异位点;系统进化树分析发现CYVCV分离物分为两大组:Ⅰ组和Ⅱ组,其中中国分离物全部聚集在Ⅰ组中,土耳其分离物Y1和巴基斯坦分离物PK聚集在Ⅱ组。3.将感染CYVCV的柠檬芽片接种到甜橙、莱檬、枳壳和HB柚的柑橘实生苗,翌年春季在甜橙新梢叶片上表现脉明、脉黄和褪绿斑等症状,而在莱檬、枳壳和HB柚植株上未观察到明显症状,采用qRT-PCR分析发现,在接种CYVCV后2年生甜橙植株上部枝条叶片中CYVCV含量明显高于中部和下部枝条叶片,且随接种时间延长,CYVCV在上部枝条叶片中快速增加,同期接种的甜橙、莱檬、枳壳和HB柚CYVCV含量分析,发现CYVCV敏感程度:甜橙>莱檬>HB柚>枳壳,随接种时间延长CYVCV在甜橙中的含量增加速度明显高于其他3种柑橘。
机 构:
领 域:
关键词:
硕士论文
《华中农业大学》 2016年硕士论文

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