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基础医学
斑点叉尾鮰病毒(CCV)ORF6基因“自杀性”DNA疫苗的构建与免疫效果研究
本研究构建了斑点叉尾鮰传统DNA疫苗和“自杀性”DNA疫苗,鉴定检测了两者在细胞中的表达差异,并对两种疫苗的免疫效果进行了比较。 1.斑点叉尾鮰病毒(Channel Catfish Virus, CCV)“自杀性”DNA疫苗的构建 根据斑点叉尾鮰病毒(CCV) ORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到“自杀性”DNA疫苗载体pSFV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1中,转化大肠杆菌DH5α后提取质粒,构建“自杀性”DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。 2. CCV ORF6基因在细胞中的表达 将待验证的表达CCV ORF6基因的“自杀性”DNA疫苗和常规DNA疫苗重组质粒分别转染293T细胞(人胚肾细胞),间接免疫荧光试验表明ORF6基因在细胞中均获得表达,但“自杀性”DNA疫苗表达载体的表达量显著低于常规DNA疫苗表达载体。 3.CCV“自杀性”DNA疫苗对斑点叉尾鮰免疫指标的影响 用构建的“自杀性”DNA疫苗ps-ORF6(Ⅲ组)与常规DNA疫苗pcd-ORF6(IV组)两种质粒制作的疫苗及对照的另外三种免疫剂(Ⅰ组为“自杀性”空载体pSFV制成、Ⅱ组为常规载体pcDNA3.1 (+)制成、Ⅴ组为缓冲液PBS)免疫80±10g的斑点叉尾鮰,分别在第0周、第2周、第4周、第6周、第8周等不同时间取血检测血液白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性、血液总蛋白含量等指标。实验结果与分析如下:(1)CCV“自杀性”DNA疫苗引起的白细胞吞噬活性较对照组有显著性差异(P<0.05),均高于其它对照组。表明CCV“自杀性”DNA疫苗能够更好地增强鱼体白细胞吞噬活性,增强免疫力。本实验结果也表明,影响斑点叉尾鮰白细胞吞噬活性的因素较多,实验各组都有所增强。(2)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清溶菌酶含量比Ⅴ组高,其中Ⅲ组和Ⅳ组显著高于其它组别(P<0.05),同时,Ⅲ组显著高于Ⅳ组(P<0.05)。表明CCV“自杀性”DNA疫苗能够有效地提高斑点叉尾鮰血清溶菌酶含量。(3)各实验组均能引起斑点叉尾鮰血清蛋白含量的增加,但是从组间存在显著性差异来看,CCV“自杀性"DNA疫苗相对其它组没有明显的优势,其结果可能受到外界的影响与免疫试剂的影响有交叉共同作用。 4.CCV“自杀性”DNA疫苗对生长的影响。 统计免疫后各组斑点叉尾鮰的生长情况,发现各组生长情况良好,组间差异不显著,表明各组免疫剂对斑点叉尾鮰生长的影响不大。
硕士论文
《华中农业大学》 2011年硕士论文

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