手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
妇产科学
应用国产荧光原位杂交探针快速检测胎儿染色体数目
目的: 研究荧光原位杂交(FISH)技术在快速产前诊断胎儿染色体数目中的应用;探讨该技术在产前遗传学疾病尤其是唐氏综合征(DS)诊断中的效果及推广价值;并摸索国产FISH探针的实验性能及在产前快速诊断中的应用前景。 方法: (1)建立FISH检测试验组及常规染色体检查对照组:在B超引导下羊膜腔穿刺抽取血清筛查DS高危孕妇17-23孕周的羊水标本,将每份标本中提取的胎儿脱落细胞不经培养分为试验组及常规组进入下一实验步骤。试验组胎儿脱落细胞经过预处理、样本变性、探针变性、杂交及其后处理、荧光显微镜观察等程序;常规组中胎儿脱落细胞进入常规细胞培养、筛选及染色体核型分析步骤。 (2)探讨FISH技术在DS快速产前诊断中的价值:通过比较两组的试验结果、吻合度及差异性,分析在适宜羊水脱落细胞检查的短暂窗口期内,FISH技术在染色体数目检测中的快速性、安全性与其准确性、特异性与常规染色体核型分析的优缺点。 (3)摸索国产FISH探针的适用条件,总结其优缺点及应用前景:应用卫生部课题组提供的自有技术生产探针,研究其在特异性染色体数目检测中的试验条件、结果准确度及稳定性等。 结果: (1)在80例合格羊水标本中,试验组中76例杂交良好,镜下观察见背景暗,荧光信号明亮清晰。4例杂交失败,其中1例在镜下背景亮,难以找到清晰荧光点;另3例镜下观察背景暗但胞核内存在大量散在荧光信号。常规组80例中79例细胞培养成功,核型分析完整清晰。79例染色体结果中78例染色体数目正常,1例发现21三体。 (2)试验组中杂交良好的76例结果与常规组中相应结果一致,且所有结果均与产后随访信息吻合。试验组平均每例标本耗时2d,成功率为95%;常规组每例标本耗时18d,成功率为98.7%。由于常规染色体核型分析属于技术成熟稳定的检测方法,从与该法的比较中提示FISH技术的成功率虽低于染色体分析,但其能够在短时间内检测出探针所对应的染色体数目,从而达到产前快速诊断的目的。特别是对于只有孕中期特定阶段适合羊水分析的孕妇来说,检查时间上的节省能够为她们争取更多寻求干预及进一步处理的宝贵机会。 (3)与进口同类产品相比较,自有技术生产FISH探针因价格较低且检测结果较理想而具备临床推广价值,但仍存在改进之处。例如对试验条件要求高、荧光信号强弱不稳定及试验结果衰退过快等。我们在预实验的摸索中发现国产探针穿透核膜的能力受到胶原蛋白杂质影响较大,因此需要增加胶原酶B的用量或延长作用时间以进一步去除杂质;对于探针变性温度和复性时间,我们也分别提升到77-78℃及延长到28min,结果满意。并且这种情况下荧光淬灭速度减慢,如在杂交后标本受到良好保存的前提下,试验后1天内仍可观察到阳性结果。 结论: (1)利用未经培养的中期妊娠羊水进行荧光原位杂交定位,可以快速准确地诊断胎儿的染色体数目,有推广应用于临床的前景。 (2)处理胎儿脱落细胞技术对于荧光原位杂交成败具有关键影响,也是延长适宜检测孕周跨度的重要指标。 (3)仍需要在控制实验室条件,不断提高国产荧光原位杂交探针检测胎儿染色体数目的稳定性与可靠性方面做进一步研究,以为将来临床普遍开展铺垫基础。
硕士论文
《安徽医科大学》 2010年硕士论文
相似文献
图书推荐
相关工具书

搜 索