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儿科学
维生素D缺乏对子代大鼠肺形态结构及血小板源性生长因子-A表达影响的实验研究
目的 以大鼠为实验对象,通过动物模型的建立,观察维生素D(VitD)缺乏对孕20天(E20d)胚胎鼠及新生1天(1d)大鼠肺的形态结构及血小板源性生长因子-A(PDGF-A)表达的影响,从而探讨VitD缺乏对肺发育的影响及可能机制。 方法 健康清洁级SD成年雌性大鼠18只,随机分为对照组、模型组及干预组3组,每组6只。实验前用高效液相色谱法(HPLC)检测各组大鼠血清25-羟维生素D[25(OH)D]水平。模型组及干预组需避光、以不含VitD的饲料喂养;对照组以正常饲料喂养。分组不同喂养两周,再次检测三组大鼠血清25(OH)D水平。雌雄鼠合笼交配,各组继前不同方式喂养。于孕17、18、19天予干预组孕鼠以活性VitD0.5mg/kg灌胃处理,并恢复光照及正常喂养。于E20d测定各组孕鼠血清25(OH)D水平。取E20d胎鼠及生后1d新生鼠的肺组织,通过光镜及电镜技术分析比较各组肺发育的形态学差异,RT-PCR方法检测PDGF-A基因的表达,免疫组织化学方法和Western-Blot方法检测PDGF-A蛋白表达部位和表达量。 结果 1.造模结果:实验开始前大鼠血清25(OH)D基础值三组之间相比较无统计学差异(P>0.05);实验两周后,模型组及干预组血清25(OH)D值均低于对照组(P<0.05)。活性VitD干预后于E20d再次测定各组孕鼠血清25(OH)D水平,干预组测得值高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。 2.HE染色光镜观察结果:E20d VitD缺乏模型组及干预组肺泡平均表面积、平均周长均小于同龄正常对照组(P<0.05),平均肺泡间隔厚度大于对照组(P<0.05)。三组于生后1d进行比较,VitD缺乏模型组肺泡平均表面积、平均周长小于对照组(P<0.05),平均肺泡间隔厚度大于对照组(P<0.05);干预组肺泡平均表面积、平均周长大于模型组,平均间隔厚度小于模型组(P<0.05)。 3.电镜观察结果:VitD缺乏模型组II型肺泡上皮细胞胞质内的板层小体数目明显少于对照组,板层小体结构疏松,染色浅,胞质内糖原沉积丰富,细胞器难见。干预组上述变化略有改善。正常对照组生后1d的大鼠肺组织II型肺泡上皮板层小体多且结构致密,胞质内发达细胞器多见;VitD缺乏模型组板层小体结构疏松,部分板层小体有排空明显而致空泡化,胞质内细胞器少;干预组未见板层小体排空现象。 4.RT-PCR结果:E20d模型组及干预组的胚胎肺组织PDGF-A mRNA表达量显著低于对照组( P < 0.05);三组新生1d大鼠肺组织PDGF-A mRNA表达量之间均有显著差异,其中对照组表达量最高,模型组表达量最低( P均< 0.05)。 5.免疫组织化学结果:E20d胎鼠肺及生后1d新生鼠肺组织支气管及肺泡上皮均可见PDGF-A蛋白表达,其中VitD缺乏模型组及干预组PDGF-A蛋白的表达均低于相同时间点对照组蛋白的表达( P<0.05)。 6.Western-blot结果:E20d及生后1d VitD缺乏模型组及干预组的鼠肺组织PDGF-A蛋白表达量均低于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论 1.孕期VitD缺乏抑制孕晚期胎鼠及新生大鼠的肺发育。表现为原始肺泡化进程受阻,肺泡间隔变厚,肺泡腔表面积和肺泡周长变小。补充活性VitD可改善上述变化。 2.VitD缺乏显著抑制孕晚期胎鼠及新生大鼠肺组织PDGF-AmRNA及蛋白的表达。 3.PDGF-A表达受抑可能参与了VitD缺乏对大鼠肺发育的影响机制。
硕士论文
《南京医科大学》 2009年硕士论文

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