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园艺
ASACC基因转化‘新红星’苹果的研究
本研究以苹果品种‘新红星’(‘starkrimson’)为试材,建立了其高效再生体系,为‘新红星’苹果遗传转化研究打下基础。采用农杆菌介导法将ASACC基因转入‘新红星’苹果中,以期获得含有ASACC基因的、耐贮藏的‘新红星’苹果新种质。研究结果如下: 1.研究了基本培养基类型、激素种类和浓度、外植体类型、暗处理时间以及叶片放置方式对‘新红星’苹果再生频率的影响,结果表明:三种外植体的最适基本培养基均为MS培养基;TDZ的诱导效果强于6-BA,最佳浓度配比为MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0g/L;叶片的再生效果最好,其次为白化茎段,茎段最差,叶片和茎段的最佳暗处理时间为3周,白化茎段的最佳暗处理时间为2周。叶片放置方式对‘新红星’苹果再生频率影响不大。 2.应用农杆菌介导法,以‘新红星’苹果的叶片为受体材料,进行了不同选择压、农杆菌侵染时间、共培养时间、抑菌素种类和浓度等遗传转化影响因素的研究,建立的‘新红星’苹果遗传转化体系为:叶片经农杆菌侵染4 min、在含TDZ1.0 mg/L,NAA0.3 mg/L的MS培养基上黑暗共培养3 d、添加250 mg/LCef,能获得最佳的GUS基因瞬时表达率为35.6%。最佳的选择压为Kin12.5mg/L 3.在利用农杆菌介导法的基础上,采用SAAT法,对‘新红星’苹果遗传转化体系进行了优化,以期提高转化效率。利用GUS基因瞬时表达的方法研究了共培养时间、超声波处理功率、处理时间、及农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(AS)浓度对苹果基因转化效率的影响。结果表明:叶盘在OD_(600)为0.6时且含有75mg/LAs的农杆菌悬浮液中侵染4 min,在此期间,用功率为80 w的超声波处理40 s,然后放到‘新红星’苹果的再生培养基上共培养3 d,获得最佳的GUS基因瞬时表达率为75.6%。 4.利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法对‘新红星’苹果的km抗性植株进行检测,结果初步表明,ASACC基因已经整合进其中的7个株系的基因组中。
机 构:
领 域:
园艺
关键词:
硕士论文
《南京农业大学》 2007年硕士论文

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