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生物学
QM基因对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨活性的影响
QM蛋白,一种被认为有抗癌活性的核糖体蛋白,在脊椎动物发育软骨中有特异性表达,并且在骺软骨区中的表达明显高于增殖区软骨中的表达水平。体内实验进一步证实,在与生长面相邻的成骨细胞的毛细管区以及在覆盖了生长面的骨膜内和骨化的二级中心区,QM表达水平最强。体外检测也发现在矿化前的成骨细胞中QM蛋白的表达水平比矿化后的水平高。以上实验结果提示我们:QM蛋白在骨的生长和代谢中很可能起着举足轻重的作用。 本研究以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,主要研究了QM基因在成骨细胞骨质形成和代谢中的作用。首先,通过RNAi (RNA interference)技术沉默掉QM基因的表达。结果发现,小鼠成骨细胞MC3T3-E1转染pSilencer3.1-H1/puro/QM质粒第3天后相对于转染空质粒的细胞出现生长速度减慢,乃至死亡的现象。转染后第8天,细胞出现大量死亡。这些结果证实了QM蛋白对小鼠成骨细胞MC3T3-E1来说的确是个很重要的蛋白,沉默掉其表达会引起细胞的死亡。为了进一步研究QM基因在成骨细胞骨质形成和代谢中的作用,我们构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A/QM并转染到MC3T3-E1中建立过表达QM蛋白的细胞系,研究其表达上调后对细胞的影响。研究结果显示,过表达QM的细胞较正常表达QM的细胞,碱性磷酸酶的活性上升,矿化结节数增多,成骨细胞中一些与生长、分化及矿化有关的特异基因的mRNA转录水平也有所提高,而流式细胞仪检测结果表明过表达QM后并不影响细胞周期的改变。 本研究初步证明了过表达QM后对小鼠成骨细胞MC3T3-E1的分化以及矿化都有一定的影响,这为QM基因在体内骨质的生长和代谢中所起的作用及其作用通路等后续研究提供了科学的依据,并且为治疗骨质疏松症药物的筛选提供了新的思路。
机 构:
领 域:
关键词:
QMMC3T3-E1RNAi过表达
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《清华大学》 2005年硕士论文
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