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生物学
鸡贫血病毒全基因组点突变体的体外构建及其在宿主细胞MSB1的转染研究
在已构建鸡贫血病毒(CAV)全基因组体外克隆(pCAV2.4)的基础上,设计一对特定引物,用PCR定向点突变方法扩增出含有完整的EocR1位点的CAV全程基因(2.3kb),并克隆入pUC_(18)载体中,获得阳性克隆,命名为pCAVE~+。经酶切鉴定和序列分析EcoR1位点两侧序列,原先不完整的EcoR I位点(—GACTTC—)已被定向点突变为完整的EcoRl位点(—GAATTC—)。对重组质粒pCAVE~+以EcoR I酶切回收CAV全基因组DNA,在体外连接并经纯化后,经Effectene转染易感宿主细胞MSB1。将转染细胞培养上清连续传代8次之后,出现病毒复制(MSB1细胞培养基颜色不再变黄)。取此时细胞培养液感染无CAV的1日龄SPF小鸡,14天出现典型的鸡贫血症状和胸腺萎缩、骨髓脂肪变性等病变。本研究获得了能在体外自主复制并组装成完整CAV病毒子的感染性核酸。
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第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集
2001年
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