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生物学
鸡痘病毒282E4株表达载体构建及新城疫病毒F蛋白的表达
将鸡痘病毒282E4株TK基因和1.5kbB片段2个非必需区克隆后,分别在TK基因Nco I位点和B片段EcoR I位点插入复合启动子(由牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子和20个串联的痘苗病毒(VV)突变型p7.5启动子串联组成),然后在复合启动子的上游插入单一启动子(人工合成的由16个串联的VV突变型p7.5启动子组成)调控的LacZ基因或GFP基因作为报告基因,构建成分别以TK基因或B片段为侧翼、以复合启动子调控目的基因的2个以LacZ为报告基因的表达载体pUTA—2161LacZ和pUBA—716LacZ,2个以GFP为报告基因的表达栽体pUTA—2f716和pUBA—7—f716。在TK基因Nco I位点和B片段EcoR I位点插入单一启动子和另一单一启动子调控的LacZ基因,得到2个分别以TK或B片段为侧翼、以单一启动子调控目的基因、以LacZ为报告基因的表达载体pUT1616LacZ和pUB1616LacZ。将构建的6个表达载体分别转染FPV HIPRA株感染的鸡胚成纤维(CEF)细胞,仅在转染以TK基因为侧翼、以LacZ为报告基因的2个表达载体pUTA—216LacZ和pUT1616LacZ收获的病毒中,在X—gal存在下,筛选出了表达LacZ的蓝色重组病毒蚀斑,而转染以B片段为侧翼的表达载体在同样培养条件下未筛选到蓝色病毒蚀斑。在同样条件下,转染以GFP为报告基因的2个表达载体pUTA—2F716和pUBA7—F716收获的病毒中,在波长509nm荧光显微镜下,未观察到表达荧光蛋白的重组病毒蚀斑。将新城疫病毒F基因插入表达载体pUTA—216LacZ中的复合启动子下游,得到重组表达质粒pUTA—216LacZF。将该质粒转染鸡痘病毒HIPRA株预感染的CEF细胞,通过筛选纯化,经Western blot检测证实,得到了表达新城疫F蛋白的重组鸡痘病毒。
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第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集
2001年
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