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生物学
-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆及在大肠杆菌中的胞外表达
本文进行了-环糊精葡萄糖基转移酶(简称-CGT 酶)基因的克隆,并在大肠杆菌 BL21(DE3)中实现了胞外表达。将来源于软化芽孢杆菌(Bacillus macerans)的 cgt 基因克隆到 pMD18-T simple 载体上并进行了序列测定,测序结果表明:克隆到的基因序列长2.1 kb, 与已发表的来源于 Bacillus macerans 的-CGT 酶基因所编码的氨基酸顺序一致;文中还通过将去自身信号肽的-CGT 酶基因插入含分泌型 pelB 信号肽和 His-tag 的高表达载体 pET 20b(+)中,构建了大肠杆菌分泌型表达载体 pECGT,并转化到表达宿主 E.coli BL21(DE3) 中,经摇瓶初步培养确定-CGT 酶胞外生产的较优培养条件为:培养基为 TB;诱导剂用量为 IPTG0.4mM;开始诱导时间为 OD1.0左右;诱导温度为37℃,诱导时间为16h。经 SDS-PAGE 分析显示 CGT 酶绝大部分分泌在胞外,胞内基本无可溶性 CGT 酶蛋白和包涵体, 发酵液中-CGT 酶可以通过镍柱亲和层析柱一步纯化。
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中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集
2007年

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