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生物学
短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶Aga1在大肠杆菌中的高效表达
短双歧杆菌(Bifidobacterium breve 203)α-D-半乳糖苷酶基因(agal)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中,构建重组质粒pBV-agal,转入到大肠杆菌中进行温度诱导表达,得到重组酶Agal在大肠杆菌DH5 a、DH10B和BL21中的比活分别为28.08 units/mg、19.44 units/mg和13.85 units/mg。重组质粒pBV-agal在E. coliBL21中稳定性较好。纯化后的重组酶蛋白亚基分子量约为67 KDa,最适反应温度为40-45℃,酶在40℃以下稳定,60℃仅剩余5%的酶活性,70℃时失去所有的酶活性;最适反应pH为4.0-4.4,酶在pH 3.6-6.0范围内稳定。酶对p-硝基苯酚-α-半乳糖苷的K(?)=1.43mmol/L,Vmax=35.71 μmol/(L·min);对蜜二糖的Ka=261mmol/L,Vmax=63.69 μmol/(L·min)。结果说明本研究中的Agal与已经报道的短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有较大差异,是一种存在于同一菌体中新发现的α-D-半乳糖苷酶。
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山东微生物学会第六次会员代表大会暨2004年学术年会论文集(上)
2004年

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