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变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

张加勤;黄珊珊;徐巧丽;饶慧华;马晓波;黄朝阳;房丽丽;郑港森;宋秀宇

  目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性。结果成功扩增出大小为269bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍。结论成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础。……   
[关键词]:变异链球菌;ldh基因;启动子
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《中国人兽共患病学报2016年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)