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HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70融合质粒在真核细胞中的表达

梁增伟;兰英华;任红;李用国;蔡大川

  目的 探讨HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70(MtHSP70)融合表达质粒在真核细胞中的表达。方法 用真核表达质粒pCI-neo作为载体构建HBsAg及其与MtHSP70的融合表达质粒(PCI-S,PCI-S-HSP70);用脂质体介导的转染法将重组质粒转染 HepG2细胞,48h后,采用RT-PCR、免疫细胞化学和ELISA检测重组质粒在HepG2细胞中的表达。结果 质粒pCI-S和pCI-S-HSP70转染的HepG2细胞总RNA用RT-PCR可检测到目的基因mRNA的表达;pCI-S和pCI-S-HSP70转染的HepG2细胞用免疫细胞化学检测,结果显示在胞浆及核周有大量的阳性颗粒;ELISA检测pCI-S转染的细胞培养上清液HBSAg为阳性,而pCI-S-HSP70转染的细胞培养上清液HBSAg为阴性;在细胞裂解液中,二者转染的细胞均为阳性。结论 HBsAg与Mt.HSP70的融合表达质粒可在HepG2细胞中表达,但表达的融合蛋白不分泌出细胞外。……