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烟草多酚氧化酶的分离提纯及性质研究

戴亚;唐宏;施春华;刘清亮

  本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过DEAE-Sephadex A-50柱后的前后顺序,命名A-5柱先洗脱的活性组分为多酚氧化酶Ⅰ(PPOⅠ),后洗脱的为多酚氧化酶Ⅱ(PPO Ⅱ)))。分离后多酚氧化酶Ⅰ的比活力是原来的71倍,而多酚氧化酶Ⅱ的比活力为原来的100倍。SDS-PAGE电泳显示分离所得的多酚氧化酶为纯品,其分子量分别为42kDa和42.5kDa。最后测量了分离得到的PPO的一些基本性质,结果表明多酚氧化酶Ⅰ在pH=7,t=40℃时具有最大活力,多酚氧化酶Ⅱ在pH=6,t=40℃时具有最大活力。动力学研究表明在pH=6.5,以邻苯二酚为底物的条件下,两种酶Km值分别为6.8mmol/L和1.2mmol/L。……   
[关键词]:烟草;多酚氧化酶;蛋白质分离纯化;含铜蛋白
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《中国烟草学报2001年04期