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野生大豆种子cDNA文库的构建与分析

王敏;刘萍;石明旺;王清连

  为了分离与鉴定野生大豆优良基因,以双高型优质野生大豆的近成熟种子为材料,采用裂解法提取了总RNA;以Oligo(dT)为引物,经SA-PMPS法分离出mRNA,反转录酶催化合成cDNA,并以cDNA第一链为模板在DNA聚合酶Ⅰ的作用下合成cDNA第二链,双链cDNA经加接头等步骤,成功构建了野生大豆cDNA文库。文库的重组率约为93.7%,PCR检测重组克隆的插入片段平均大于1000bp,测序片断大于500bp,表明构建的近成熟种子cDNA文库质量较高,为进一步进行EST测序和全长克隆打下了基础。……   
[关键词]:野生大豆;种子;cDNA文库;PCR
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物技术通讯2005年05期