手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

穴蚁蛉幼虫全长均一化cDNA文库的构建

杨展;李广宏;邱壮伟;王欢歌;苏志坚;黄亚东

  通过构建穴蚁蛉幼虫(俗称蚁狮)全长均一化cDNA文库,以期了解蚁狮的抗菌肽、毒素蛋白以及其它药用蛋白种类,为日后筛选、克隆表达和分离纯化这些药用蛋白奠定基础。用针刺诱导蚁狮产生抗菌物质后,分离纯化总RNA,结合SMART全长文库与DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建全长均一化cDNA文库,并通过平板计数和菌落PCR方法鉴定文库。随机挑选192个单克隆进行5′端测序,并与NCBI数据库进行比对分析。结果显示,构建出的文库平均插入片段长度为1 200 bp,原始文库的滴度达到7.5×105CFU/mL,而扩增文库则为1.95×1011CFU/mL。在所挑选的单克隆中,共获得190条有效序列,平均读长1 340 bp,文库重组率达到98.96%。与NCBI数据库比对后发现,这些序列可能是一些编码蚁狮免疫、消化及毒性蛋白的基因。……   
[关键词]:穴蚁蛉;蚁狮;全长cDNA文库;均一化;EST分析
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物技术通报2011年05期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)
App内打开