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洋葱黄矮病毒检测试剂盒的研制

贾玉成;韦传宝

  根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)序列设计引物,扩增洋葱黄矮病毒(OYDV)六安分离物外壳蛋白(CP)基因。序列同源性分析结果表明,与目前已报道的OYDV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为84.0%~95.8%,相应推测的氨基酸序列同源性为86.8%~97.6%。将CP基因插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)Plys S中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化诱导产物,免疫家兔获得抗CP血清,Western blot分析对CP具有高度特异性。硫酸铵沉淀初步IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶4800的一抗。将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成OYDV检测试剂盒,可用于田间OYDV病样检测。……   
[关键词]:韭葱黄条病毒;CP基因;原核表达;抗血清制备
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物技术通报2009年12期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)