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人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化与生物功能研究

冯怡;崔立斌;刘传暄;马清钧

  内皮抑素 (Endostatin)是近年来新发现的一种内源性新生血管生成 (Angiogenesis)抑制因子 ,通过抑制新血管生成而抑制肿瘤的形成和转移且不会引起耐药性 ,具有极高的临床应用前景。巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)具有表达率高、产物可分泌、可对高等真核生物蛋白正确进行翻译后加工、遗传稳定、发酵工艺成熟等优点被用来进行重组人Endostatin的表达。本研究用PCR的方法从人胎肝cDNA文库中扩增出人Endostatin的cDNA ,测序正确后转入毕赤巴斯德甲醇酵母 ,并获得了高效可溶型表达 ,用肝素亲和层析的方法进行纯化 ,纯化后产物经SDS PAGE薄层扫描分析纯度达 98 7%以上 ,质谱测定分子量为 2 043kD与理论值一致 ,蛋白质N端序列测定结果为SPPAHTHRDFQPVLH与天然序列一致。生物活性检测证明可抑制鸡胚尿囊绒毛膜 (CAM)的新生血管生成 (Angio genesis) ,并可抑制血管内皮细胞的增殖。因此用酵母表达系统可以得到具有生物活性的内皮抑素 ,经纯化后可用于进一步的生物功能和作用机理试验……   
[关键词]:内皮抑素;毕赤巴斯德酵母;新生血管生成
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物工程学报2001年03期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)