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凝乳酶原(凝乳酶)二硫键Cys206-Cys210的定位突变

陈红杰;潘学峰;张国宝;刘年娟;张渝英;杨开宇

  在对凝乳酶原二硫键Cys2 0 6Cys2 10进行定位突变过程中发现 ,在相应的模板序列中有自身形成自由能为 - 161kcal/mol的茎环结构倾向 ,妨碍与引物结合 ,从而难以合成突变的DNA ,采用快退火可解决此矛盾。 5个突变基因均能在大肠杆菌中高效表达 ,除C2 0 6A外 ,约占细胞总蛋白的 5 0 %左右。突变体的复性结果表明 ,Cys2 0 6Cys2 10对凝乳酶原正确折叠不是绝对必需的 ,但相应位置的氨基酸取代对复性效率有显著影响 ,在 5个突变体中 ,C2 0 6A/C2 10A的复性率分别为C2 0 6S/C2 10S、C2 10A、C2 10S的 4 5倍、2 0倍和 30倍 ,而C2 0 6A完全不能复性。C2 0 6A/C2 10A与C2 0 6S/C2 10S的远紫外CD光谱与野生型基本相同 ,其荧光发射光谱与野生型相比最大发射峰不变 ,而荧光强度有显著增加。由于上述 3个蛋白具有相同比活 ,说明突变分子能形成具有生物活性的空间构象 ,而只是某些色氨酸残基微环境受到微扰。……   
[关键词]:定位突变;二硫键;凝乳酶原;凝乳酶
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物工程学报2001年01期