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乳酸克鲁维酵母高拷贝整合载体的构建及应用

唐南筠;霍克克;李育阳

  用酿酒酵母26srDNA作探针克隆了乳酸克鲁维酵母K.lactis2.2kbrDNA片段,对其作限制性内切酶图谱分析。以该基因片段为同源整合的靶顺序,酿酒酵母URA3基因为选择标记构建整合载体质粒pIRK,并对其在宿主K.lactisMW98-8c细胞中的整合位点,拷贝数及稳定性进行测定和分析。结果表明:质粒整合在转化子IV号染色体的rDNA位点;载体转化后的平均整合拷贝数约为120;在完全培养基上连续培养50代,质粒稳定性这95%-100%。用载体pIRK表达外源基因LAC4,实验表明,表达载体的稳定性好,拷贝数和表达量在一定程度上成正相关,转化子产生的半乳糖苷酶最高活性是K.fragilis野生菌株所产生的8.6倍。……   
[关键词]:乳酸克鲁维酵母:rDNA;整合载体;LAC4基因
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《生物化学与生物物理学报1996年05期