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大肠杆菌分子效伴侣GroEL和GroES蛋白的高效表达、纯化与鉴定

许峥;陈小明;郑卫东;杨胜利;朱德煦

  研究分子伴侣对解决蛋白质折叠的理论问题及基因工程包涵体的实际问题是很有用的。本文讨论的是E.coli的分子伴侣-属于hsp60家族的GroEL蛋白及其辅助蛋白GroES。重组质粒pGroESL含有大肠杆菌的groEL和groES基因。利用这个表达载体,经摇瓶发酵,IPTG诱导表达大量的GroEL和GroES蛋白。破菌后,上清经DE52—celulose柱层析,硫酸铵分级沉淀,SephacrylS-200和DEAE-Sepharose柱层析,得到纯度分别为85%和80%的GroEL和GroES蛋白。SDS-PAGE结果显示GroEL和GS蛋白亚基的分子量与理论值相符,同时还定到了GroEL蛋白的ATP水解酶活力。这种纯化方法操作简单,重复性好,并且可同时得到GroEL和GroES蛋白。这两种蛋白可进一步用于体外变性蛋白重折叠的研究……   
[关键词]:分子伴侣;GroEL和GroES蛋白;表达;纯化
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《南京大学学报(自然科学版)1997年01期