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苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白cry2Ad2原核表达及其不同长度片段产物的杀虫活性

谢雅晶;冯纪年;张存政;王耘;赵龙龙;刘贤进

  该研究采用NCBI蛋白分析软件对Cry2Ad2蛋白序列进行分析,采用PCR克隆获得3种不同长度的cry2Ad2及全长cry2Ad2基因片段,并将这些基因片段克隆到pET-26b载体上,构建重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3,再导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行细胞周质诱导表达,并采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾的毒力。Cry2Ad2蛋白的序列分析结果表明:全长的Cry2Ad2蛋白包含两个保守区域domain I(第53位~第264位氨基酸)和domainⅡ(第267位~第472位氨基酸),推测保守活性片段C端末端在N-端的第472位与第633位氨基酸之间。重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳验证分别含有约70 000、52 000、51 000和54 000的表达蛋白。生物活性初步测定结果表明:表达的Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2及Cry2Ad2-3给药72 h后对小菜蛾都具有杀虫活性,其中蛋白Cry2Ad2、Cry2Ad2-2与Cry2Ad2-3对小菜蛾有较强的毒性,相同剂量致死率分别为64.35%、53.27%和61.66%,统计分析表明蛋白Cry2Ad2-1与Cry2Ad2-3的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率无显著差异,(P>0.05);蛋白Cry2Ad2-2对小菜蛾的毒力相对较低,相同剂量致死率为39.89%,蛋白Cry2Ad2-2的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率差异显著(P<0.05)。鉴此,初步推断Cry2Ad2蛋白对小菜蛾的活性区在第49位与第463位氨基酸之间。……   
[关键词]:苏云金芽孢杆菌;Cry2Ad2蛋白;活性区;小菜蛾
[文献类型]:期刊
[文献出处]: 《江苏农业学报2011年06期
[格式]:PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)